Kromatografi kolom adalah metode yang banyak digunakan untuk memisahkan dan memurnikan campuran senyawa kimia. Instrumentasi kromatografi kolom melibatkan beberapa komponen kunci yang menjamin pemisahan yang efektif. Berikut gambaran umum instrumentasinya:
1. Kolom
Bahan:Biasanya terbuat dari kaca, baja tahan karat, atau plastik.
Ukuran:Bervariasi berdasarkan skala kromatografi (analitis, preparatif, atau industri).
Dikemas dengan:Fase diam (misalnya silika gel, alumina, atau resin).
Frit atau Filter:Mencegah fase diam keluar dari kolom bersama fase gerak.
2. Fase Stasioner
Komposisi:Bahan padat dengan sifat adsorpsi tertentu.
Jenis:Gel silika, alumina, atau resin yang difungsikan (misalnya bahan penukar ion atau bahan afinitas).
3. Fase Seluler
Campuran Pelarut atau Pelarut:Membawa sampel melalui fase diam.
Jenis:Non-polar (misalnya heksana), polar (misalnya metanol, air), atau gradien polaritas.
4. Injektor Sampel
Digunakan untuk memasukkan campuran sampel ke dalam kolom.
Bisa berupa injeksi manual atau sistem otomatis untuk pengendalian yang presisi.
5. Pompa (Opsional)
Memastikan aliran fase gerak yang konsisten.
Digunakan dalam kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) atau ketika diperlukan kontrol aliran yang tepat.
6. Detektor (Opsional)
Mengidentifikasi dan mengkuantifikasi komponen yang terpisah secara real-time saat komponen tersebut dielusi dari kolom.
Contohnya meliputi:
Spektrofotometer UV-Vis
Detektor Fluoresensi
Spektrometer Massa (MS)
Detektor Indeks Bias (RI).
7. Kolektor Pecahan
Mengumpulkan fraksi senyawa yang terpisah saat dielusi dari kolom.
Mungkin mencakup pengumpulan otomatis berdasarkan waktu atau sinyal detektor.
8. Sistem Akuisisi Data (Opsional)
Merekam dan menganalisis data dari detektor.
Menghasilkan kromatogram yang menampilkan proses pemisahan.
9. Aksesoris
Regulator Tekanan:Cegah tekanan berlebih.
Termostat atau Pemanas:Kontrol suhu kolom, jika perlu.
katup:Kelola aliran fase gerak dan sampel.
Untuk pengaturan yang lebih sederhana (misalnya, kromatografi kolom berbasis gravitasi), pompa, detektor, dan sistem otomatis mungkin tidak diperlukan. Sebaliknya, sistem gravitasi atau tekanan rendah mendorong fase gerak melalui fase diam.